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蛋白质鉴定

一、 蛋白质大规模鉴定(LC-MS/MS SHOTGUN)分析:

1999年,Yates研究组提出“鸟枪法”(shotgun),其基本技术路线是针对液体或SDS-PAGE条带的复杂混合物用酶(Trypsin)酶解成肽段混合物,然后对肽混合物进行多维毛细管液相色谱分离和串联质谱分析以及数据库检索,从而确定蛋白质的种类,可同时鉴定成百上千种蛋白质。他们把这种思路称为多维蛋白质鉴定技术,即Mud PIT(multidi-mensional protein identification technology)。与传统的双向电泳技术相比具有灵敏度更高,动态检测范围更广等特点。研究对象是完整的组织、体液或其提取物,其目的在于鉴定出尽可能多的肽和蛋白质分子。将溶液内蛋白质分子或SDS-PAGE条带的复杂混合物酶解成肽段混合物,通过液相色谱分离,如2D-LC(阳离子柱SCX和C18反相柱串联)或1D-LC的C18反相柱,串联质谱测试,最后用相应的数据库进行检索匹配,可同时鉴定成百上千种蛋白质。

 

蛋白质鉴定

 

二、蛋白质胶点鉴定

利用MALDI-TOF/TOF蛋白鉴定技术对考/银染的2D或DIGE点样本或者较纯的蛋白样本进行蛋白鉴定。适合较纯或比较单一的蛋白质样品,如双向凝聚电泳差异点鉴定。基本流程是双电泳后选出差异蛋白点,进行胶内酶切,然后使用MALDI-TOFTOF质谱技术进行蛋白质鉴定。该技术具有速度快通量高的特点.

 

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