磷酸化修饰蛋白质组

1.1 磷酸化修饰蛋白质组

磷酸化(Phosphorylation)是生物体内存在最为广泛的一种蛋白质翻译后修饰类型,调节了包括细胞增殖、发育、分化、信号转导、细胞凋亡、神经活动、肌肉收缩及肿瘤发生等过程在内的所有活动。分析研究蛋白质的磷酸化修饰状态,有助于进一步发掘与疾病发生发展相关的重要生物标志物。

近年来液相色谱-质谱连用技术为核心的“鸟枪法(shotgun)”蛋白质组学快速发展,磷酸化肽段/蛋白质富集及分级技术的进步,磷酸化肽段质谱碎裂方式、高速扫描高质量精度质谱以及磷酸化肽段定性定量相关软件的巨大发展,这些均为大规模、高通量蛋白质磷酸化分析提供了有力的基础。目前的蛋白质磷酸化分析中,在保证实验结果可靠准确的同时,在一次实验中可对成千上万个磷酸化位点同时进行分析表征。


技术路线

磷酸化修饰蛋白质组


1.1.1 广谱磷酸化Thr/Ser修饰组

拜谱生物广谱磷酸化Thr/Ser修饰组主要采用固定金属离子亲和色谱法(IMAC)、TiO2法富集磷酸化肽段。酸性条件下TiO2带正电荷,可与样品中磷酸化肽段上带有负电荷的磷酸基团特异性结合,经清洗缓冲液洗去非磷酸化肽段后,用碱性洗脱液可以将结合在TiO2上的磷酸化肽段洗脱下来,从而达到特异性富集磷酸化肽的目的。IMAC是由基底材料、螯合剂、金属离子构成的,基底材料主要有琼脂糖、多孔玻璃、硅胶维和聚合物等,它们与螯合剂交联成为固定相。典型的螯合剂有亚氨基二乙酸(IDA)和次氮基三乙酸(NTA),金属离子通过螯合剂被固定在固定相上,常用的金属离子为Fe3+Ga3+

磷酸化修饰蛋白质组

 

1.1.2 酪氨酸磷酸化修饰组

酪氨酸磷酸化通常在生长因子、细胞借宿、抗原和应激时发生,是癌症细胞转变过程中的主要信号,目前已知的致癌基因有3/4是酪氨酸激酶基因,是细胞通信、生长和增殖、细胞周期调控、癌变的发生和转移、神经传导、血管和胚胎形成、许多先天遗传病和后天疾病的一个关键步骤。拜谱生物酪氨酸磷酸化修饰组主要采用酪氨酸磷酸化基序抗体富集磷酸化肽段,特异性高。


样品要求


样品类型

样品要求

植物叶片

湿重≥3g

植物根茎、木质部、韧皮部等

湿重≥5g

细胞样品

细胞量湿重≥5*107

组织样品

人、动物、微生物湿重≥50mg;

体液样品

血清、血浆体积≥200μl,、脑脊液≥500μl,尿液≥1000μl


拜谱生物收样表下载:定量N糖基化蛋白质组分析蛋白质组学送样表(拜谱生物)


相关产品