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定量乙酰化蛋白质组分析

蛋白质的乙酰化修饰是在乙酰基转移酶的作用下,蛋白质的赖氨酸残基上添加乙酰基的过程,是细胞控制基因表达、蛋白质的活性或生理过程的一种机制。乙酰化修饰功能主要集中在对细胞染色体结构的影响以及对核内转录调控因子的激活方面 。

 

技术流程



定量乙酰化蛋白质组分析 


样品经Trypsin酶切,酶切产物由乙酰化特异性抗体(Cell Signaling Technology 13416S)进行乙酰化肽段的富集,富集后由高精度质谱分析,分析数据由生物信息学软件进行数据检索。

 

研究方法

定性:

利用纯化乙酰化底物的抗体富集并利用高通量质谱检测,该方案具有高灵敏度和高特异性。

定量:

1.       iTRAQ定量:将iTRAQ技术和蛋白质修饰富集技术相结合,可以对2-8种生物样本中的乙酰化修饰进行相对定量。

2.       非标记(label-free)定量:将非标记定量技术应用于蛋白质翻译后修饰的相对定量,无需昂贵的稳定同位素标记试剂但定量受样本数量限制。

 

样品要求



样品类型

样品要求

植物叶片

湿重≥3g

植物根茎、木质部、韧皮部等

湿重≥5g

细胞样品

细胞量湿重≥5*107

组织样品

人、动物、微生物湿重≥50mg;

体液样品

血清、血浆体积≥200μl,、脑脊液≥500μl,尿液≥1000μl




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