N糖基化蛋白质组分析

N-糖基化(N-Glycosylation)是最重要的蛋白质翻译后修饰之一,主要在复杂的多细胞或组织形成过程中起关键作用,参与细胞与细胞的连接、受体配体的相互作用、免疫应答、细胞凋亡及各种发病机理等生物学过程。拜谱生物N-糖基化蛋白质修饰组,利用凝集素富集N-糖基化肽段,高通量,高分辨,可分析不同实验条件下糖基化蛋白质组变化及信号通路,以及候选糖蛋白标志物的筛选等。

 定量N糖基化蛋白质组分析

N-糖基化



技术原理与实验流程:

糖分子自身的复杂性和许多N-glycoproteins低表达水平使得对N-glycosylation结构的表征的描述极为困难。在检测低丰度的N糖基化修饰蛋白或肽段时,其中掺杂大量未修饰的蛋白肽断,这很容易将低丰度的糖基化修饰蛋白肽段的信号掩盖。凝素亲和法是目前糖蛋白质组学中应用最广泛的分离富集方法。凝集素(lectin)是一类糖结合蛋白质,能专一识别某一特殊结构的单糖或聚糖中特定的糖基序列而与之结合,它们与糖链可逆非共价结合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕获之后,通常用特定的单糖通过竞争结合凝集素将糖蛋白或糖肽洗脱下来。

蛋白质经过酶解后利用凝集素(lectin)富集N-糖基化肽段,然后用N-糖酰胺酶(PNGase)在H218O中切除连接在天冬酰胺残基(Asn)上的糖链。该处理致使Asn分子量增加2.9890Da。最后用高精度LC-MS质谱仪检测脱糖后的肽段,通过检索数据库,确认脱糖后分子量与其理论分子量的变化以及糖基化修饰肽段的序列,从而确定该蛋白质的N-糖基化位点。N-糖基化位点确定之后,再利用label-free的原理对其进行定量分析。


定量N糖基化蛋白质组分析

实验流程图


产品特色:

1大规模的蛋白质组N-糖基化位点的鉴定与分析

2采用凝集素特异性富集N-糖基化肽段

3高通量,高分辨

 

应用方向:

1、不同实验条件下糖基化蛋白质组变化及信号通路分析

2、筛选候选糖蛋白标志物

 

样本要求:

样品类型

样品要求

植物叶片

湿重3g

植物根茎、木质部、韧皮部等

湿重5g

细胞样品

细胞量湿重5*10

组织样品

人、动物、微生物湿重50mg

体液样品

血清、血浆体积200μl,、脑脊液≥500μl,尿液≥1000μl


 

参考案例:

1Zielinska DF, Gnad F, Schropp K, Wiśniewski JR, Mann M. Mapping N-glycosylation sites across seven evolutionarily distant species reveals a divergent substrate proteome despite a common core machinery. Mol Cell. 2012;46(4):542-548. doi:10.1016/j.molcel.2012.04.031


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