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二硫键配对分析
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方法简介


二硫键是通过蛋白质中两个半胱氨酸上的巯基氧化而形成的,是一种重要的蛋白质翻译后修饰。在非还原状态下,用IAA将蛋白质游离的Cys封闭,再分别用Trypsin、Chymotrypsin、Glu-C进行酶切,酶解产物通过质谱检测后进行分析,通过匹配所得到的MS/MS图谱,找出二硫键连接的肽段,确定二硫键的配对方式。


二硫键配对分析


样品要求


关于样品:请确保蛋白浓度大于1mg/ml, 最小量不得低于50Pmol,蛋白纯度最好大于90%;含盐量:挥发性无机盐<20mM,不挥发性无机盐<5mM;蛋白溶液避免SDS等变性剂,表面活性剂,或其它保护剂,不含tris缓冲体系。

样品运输:请使用足量的干冰运输,并尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。



案例分析


二硫键配对分析


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