方法简介

一般发生N-糖基化位点修饰的蛋白质，均有基本的氨基酸结构骨架。N-糖基化位点鉴定通常使用PNGase F酶释放糖链， 天冬酰胺(N)发生脱氨基化，为了避免天然脱氨基化造成的假阳性，在 18 O水中进行酶切， 使去糖基化位点含有一个18 O，形成+2.9890Da。通过高精度LC-MS/MS检测脱糖后肽段，确认脱糖后分子量与理论分子量的变化以及糖基化修饰肽段的序列，从而确定蛋白质的糖基化位点。

样品要求

关于样品：至少需要20ug的蛋白质，纯度>90% ；含盐量：挥发性无机盐<20mM，不挥发性无机盐<5mM；蛋白溶液避免SDS等变性剂，表面活性剂，不含tris缓冲体系。

样品运输：请使用足量的干冰运输，并尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。

案例分析