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N糖基化位点分析
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方法简介


一般发生N-糖基化位点修饰的蛋白质,均有基本的氨基酸结构骨架。N-糖基化位点鉴定通常使用PNGase F酶释放糖链, 天冬酰胺(N)发生脱氨基化,为了避免天然脱氨基化造成的假阳性,在 18 O水中进行酶切, 使去糖基化位点含有一个18 O,形成+2.9890Da。通过高精度LC-MS/MS检测脱糖后肽段,确认脱糖后分子量与理论分子量的变化以及糖基化修饰肽段的序列,从而确定蛋白质的糖基化位点。

N糖基化位点分析


样品要求


关于样品:至少需要20ug的蛋白质,纯度>90% ;含盐量:挥发性无机盐<20mM,不挥发性无机盐<5mM;蛋白溶液避免SDS等变性剂,表面活性剂,不含tris缓冲体系。

样品运输:请使用足量的干冰运输,并尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。


案例分析


N糖基化位点分析

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