方法简介

Edman降解法是由菲尔•埃德曼首先创立用于肽链或蛋白质中N-端氨基酸序列分析的方法。Edman测序反应包括3步：第一步是在碱性条件下，PITC（异硫氰酸苯酯）与蛋白N端的游离氨基结合；第二步是在酸性溶液中，N端残基被切除；第三步是PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH（乙内苯酰硫脲）残基，经过在线的HPLC分析，根据洗脱时间确定氨基酸种类。可分析N端30个氨基酸。

样品要求

关于样品：可以提供蛋白冻干粉，蛋白溶液或固定在PVDF膜上的蛋白；至少需要25 pmol的蛋白质；纯度>95% ；含盐量：挥发性无机盐<20mM，不挥发性无机盐<5mM；蛋白溶液避免SDS等变性剂，表面活性剂，不含tris缓冲体系。

样品运输：请使用足量的干冰运输，并尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。

案例分析