方法简介
Edman降解法是由菲尔•埃德曼首先创立用于肽链或蛋白质中N-端氨基酸序列分析的方法。Edman测序反应包括3步:第一步是在碱性条件下,PITC(异硫氰酸苯酯)与蛋白N端的游离氨基结合;第二步是在酸性溶液中,N端残基被切除;第三步是PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH(乙内苯酰硫脲)残基,经过在线的HPLC分析,根据洗脱时间确定氨基酸种类。可分析N端30个氨基酸。

样品要求
关于样品:可以提供蛋白冻干粉,蛋白溶液或固定在PVDF膜上的蛋白;至少需要25 pmol的蛋白质;纯度>95% ;含盐量:挥发性无机盐<20mM,不挥发性无机盐<5mM;蛋白溶液避免SDS等变性剂,表面活性剂,不含tris缓冲体系。
样品运输:请使用足量的干冰运输,并尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。
案例分析
